免疫荧光
免疫荧光
免疫学的基本反应是抗原-抗体反应。由于抗原抗体反应具有高度的特异性,所以当抗原抗体发生反应时,只要知道其中的一个因素,就可以查出另一个因素。免疫荧光技术就是将不影响抗原抗体活性的荧光色素标记在抗体(或抗原)上,与其相应的抗原(或抗体)结合后,在荧光显微镜下呈现一种特异性荧光反应。
技术步骤:
①固定:4%多聚甲醛,室温固定20 min,PBS洗三次,每次3 min;
②透膜:0.5% Triton X-100 in PBS,室温10 min,PBS洗三次,每次3 min;
③封闭:1%BSA in PBS,室温30 min,PBS洗一次,3 min;
④一抗:按照抗体说明书配制适当比例的一抗,室温1-2 h或4 ℃过夜,PBS洗三次,每次5 min;
⑤二抗:按照抗体说明书配制适当比例的二抗,室温1-2 h,PBS洗三次,每次5 min;
⑥细胞核染色:1 μg/mL DAPI,室温10 min,PBS洗三次,每次5 min;
⑦封片:2-3 μL抗淬灭剂封片。
⑧观察:用荧光显微镜观察结果。
客户提供:
① 组织:新鲜或固定(10%中性甲醛、4%多聚甲醛)组织样本;
② 细胞:新鲜(大于10E6)或固定(10%中性甲醛、4%多聚甲醛)细胞样本;
③ 切片:石蜡切片,冰冻切片以及细胞爬片,涂片;
④ 实验材料:一抗;
公司提供:
① 染色后的切片;
② 电子图片;
③ 实验报告(材料、试剂、仪器、方法、数据分析、实验结果);